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染色技术

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PAS染色

发表日期:2016年03月11日 点击击数: 1384

PAS染色全称为过碘酸雪夫氏染色(schiff periodic acid shiffPAS),又称糖原染色。片子上存在的糖原或多糖类物质中的乙二醇基经过碘酸氢化,转变为二醛基,与雪夫试剂中的无色品给结合,形成紫红色化合物。糖原染成紫红色。基底膜、系膜基质、纤维蛋白、血管透明变性、淀粉样物质等可显示阳性反应,呈紫红色。可以观察系膜基质、GBMTBM。但系膜基质(MM)染得比实际宽(夸张),且GBM很少用该染色。

操作步骤

1. 固定液:Carnoy液或75%酒精 Carnoy固定液: 纯酒精 60 ml 冰醋酸 10ml 氯仿 30ml 2. 染色液

1) 过碘酸酒清夜配法:

过碘酸(HIO .2H O) 0.4g

95% 酒精 35ml

M/5醋酸钠(2.72g+蒸馏水100ml) 5ml

蒸馏水10ml

保存于冰箱内,用棕色瓶,可用两周.

2) Schiff氏液:

0.5克碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解.冷却至50℃后过滤,加入10毫升1N盐酸.冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存.

3) Schiff氏酒精液配置

Schiff氏液 11.5ml

1N HCI 0.5ml

纯酒精 23ml

4) 亚硫酸水

10%偏重亚硫酸钠 10ml

1N HCI 10ml

蒸馏水 180ml的树胶溶解。

PAS组织染色流程:
1.
烤片60℃~65℃,1~2h,从烤箱中取出切片,无需冷却,立即放入二甲苯溶液中脱蜡30min,梯度酒精脱二甲苯,流水冲洗5min
2.滴加0.5%高碘酸,湿盒内反应10min,流水冲洗2min
3.滴加Schiff液,湿盒内避光反应15min
4.苏木素30sec,流水冲洗5min,盐酸酒精3sec,流水冲洗5min,碳酸锂或氨水3sec,流水冲洗5min
5.梯度酒精脱水,二甲苯透明30min,中性树胶封片

结果:糖原、粘液蛋白呈紫红色,细胞核呈蓝色。

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